去甲肾上腺素转运体（norepinephrine transporter，NET）是单胺转运体家族的重要成员，负责再摄取大脑突触间隙的去甲肾上腺素和多巴胺，与血清素转运体及多巴胺转运体共同维持突触单胺类神经递质的稳态。NET在调节情绪、注意力及应激反应中发挥关键作用，是治疗重度抑郁症和注意缺陷多动障碍等神经精神疾病的重要药物靶点。然而，NET如何被不同药物精准调控，尤其是其构象选择性与变构调控机制，仍有待深入阐明。

继在Nature（2024）上首次揭示NET同源二聚化机制及抗抑郁药物识别机制后，2025年10月24日，中国科学院上海药物研究所徐华强研究员、杨德华研究员团队，联合临港实验室蒋轶研究员、王震研究员团队，在Cell上在线发表了题为“Unveiling conformation-selectivity regulation of the norepinephrine transporter”的研究论文。该研究鉴定了NET内向开放构象特异性的变构位点，提出了靶向该构象的阻断剂识别新机制——“瓣膜模型”。基于该模型，研究团队采用“干–湿”结合的研究策略，发现了具有体内外抗抑郁活性的小分子，并通过结构药理学手段阐明了其结合模式。该成果为理解NET及其他单胺类转运体的配体调控机制奠定了重要的结构基础，也为开发靶向单胺转运体的抗抑郁等神经精神疾病药物提供了新思路。

研究团队解析了人源NET分别与抗抑郁药物左米那普仑、维拉佐酮，以及NET与多巴胺转运体双重再摄取抑制剂伐诺司林结合的三个冷冻电镜结构，分辨率达2.44–2.52 Å（图1A）。研究显示，三种复合物中NET均呈现内向开放构象。左米那普仑结合于一个NET内向开放构象特异的新型变构位点（图1B）。该位点被命名为S3，以区别于中央正构位点S1和位于靠近胞外区的外向开放构象变构位点S2。与之不同，维拉佐酮和伐诺司林则同时占据S1与S3位点（图1C, D）。

通过对三个复合物结构的精细分析，与已报道的齐拉西酮–NET复合物进行结构比较（PDB：8WTY），并结合分子对接结果，研究团队提出了NET抑制剂识别的“瓣膜模型”：NET内向开放空腔中的两个关键苯丙氨酸残基F72和F329如同“心脏瓣膜”，其侧链相对排列，且侧链构象随不同抑制剂的结合而发生改变。这两个残基将内向开放空腔分隔为内室与外室两个非对称区域。不同化学结构（如线性或非线性、体积与长度）的抑制剂被“瓣膜”引导结合至不同区域：左米那普仑、维拉佐酮和伐诺司林结合于外室，而齐拉西酮则结合于内室（图2）。该模型揭示了NET如何特异性识别结构多样的抑制剂，为理性药物设计提供了新的理论框架。

基于上述结构模型，研究团队对包含超过52万种小分子的化合物库进行了针对NET内向开放构象的虚拟筛选。经过多轮筛选与生物学验证，最终获得活性化合物F3288-0031（图3A-C）。该化合物在体外表现出强效的NET抑制活性，并在小鼠强迫游泳实验中显示出明确的抗抑郁样效果，且未影响自发活动（图3C-E）。

研究团队进一步从结构的视角确证了F3288-0031结合于NET内向开放构象特异性的变构位点，其结合特征符合“瓣膜模型”。进一步的药代动力学与脱靶效应研究表明，F3288-0031能够有效入脑，主要通过抑制NET和血清素转运体发挥治疗作用，且与其他关键神经靶点的交叉反应性较低，显示出良好的成药性与安全性。

本研究系统揭示了NET在内向开放状态下与不同抑制剂的结合模式，提出了构象选择性变构调控的全新“瓣膜模型”。这些发现不仅深化了对单胺转运体家族配体识别与调控机制的理解，更证实了靶向NET内向开放构象开发高选择性抑制剂的可行性。研究通过“结构解析–计算筛选–功能验证–结构验证”的多学科闭环研究策略，成功将靶标机制的基础研究成果转化为具有明确药理潜力的活性分子，为抗神经精神疾病创新药物的研发提供了新范例（图4）。

临港实验室蒋轶研究员、上海药物所徐华强和杨德华研究员、临港实验室王震研究员为该研究的共同通讯作者。上海药物所张衡副研究员、临港实验室与上海科技大学联合培养博士生章天炜、临港实验室王鼎言青年研究员、上海药物所代安涛助理研究员、临港实验室与上海科技大学联合培养博士生毛建航为该论文的共同第一作者。该研究得到了科技部重点研发计划、国家自然科学基金、上海市科学技术委员会和中国科协青托等基金项目的支持。

全文链接： https://doi.org/10.1016/j.cell.2025.10.002

图1. NET与左米那普仑、维拉佐酮和伐诺司林复合物的结构

图2. 抑制剂内向开放构象特异性识别NET的“瓣膜模型”

图3. “干-湿”结合筛选NET内向开放构象靶向的抗抑郁活性分子

图4. 基于结构的NET构象选择性变构抑制剂发现

（供稿部门：徐华强课题组）